SEM con caras de bloque en serie
Seccionamiento y captura altamente automatizados de imágenes de datos volumétricos
Representación esquemática de un flujo de trabajo típico
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Una muestra sumergida en resina se corta con un ultramicrótomo montado dentro de la cámara del SEM. Se capturan imágenes de la superficie expuesta de la muestra. Este proceso de corte y captura de imágenes se repite hasta que se consigue capturar una imagen completa de la estructura de interés.
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Las imágenes de microscopio electrónico adquiridas se procesan y alinean digitalmente en un conjunto de datos en 3D. Los compartimentos celulares se pueden identificar y segmentar.
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El conjunto segmentado de datos en 3D se puede visualizar, estudiar y analizar estadísticamente.
Ejemplos de aplicación
Comprender la relación entre la estructura y la función
Captura de imágenes de detalles ultraestructurales de neuronas
El cerebro es un órgano complejo con millones de conexiones neuronales y vías de señalización. Comprender la relación entre la estructura y la función del tejido cerebral ayuda a aclarar parte de esta complejidad, con el fin de entender mejor cómo se organizan las redes neuronales y, a largo plazo, saber cómo tratar ciertas patologías a través de intervenciones médicas.
Captura de imágenes de neuronas en un cultivo celular
SBF-SEM es la solución adecuada para captar imágenes y seguir neuronas con protuberancias largas y delgadas, como las dendritas y los axones. Las neuronas de un cultivo celular son especialmente difíciles de captar. La elevada proporción de resina no conductora hace que las muestras sean propensas a presentar carga. Focal Charge Compensation mitiga los efectos de carga y garantiza una elevada calidad de imagen. Los detalles ultraestructurales de las neuronas pueden visualizarse y definirse fácilmente con la SBF-SEM en combinación con Focal Charge Compensation.
Las imágenes muestran un único corte de un conjunto de datos en 3D de un cultivo de neuronas del hipocampo que expresan PSD95-APEX2 para teñir las densidades postsinápticas (flechas). Las imágenes se adquirieron con un ZEISS FESEM, ultramicrótomo integrado y Focal Charge Compensation. La ultraestructura, como las dendritas finas y las conexiones, son visibles con alta resolución gracias a la eliminación de los efectos de carga.
Neuronas individuales y compartimentos celulares del tejido cerebral de ratón
El vídeo muestra las secciones transversales de una muestra de cerebro de ratón captadas con SEM con caras de bloque en serie. La alta resolución que proporciona este enfoque puede observarse claramente en cada una de las imágenes de caras en bloque único. Las neuronas individuales y los compartimentos celulares pueden identificarse y seguirse a lo largo de la dimensión z.