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ZEISS Spectral RICS

Mapa de las interacciones moleculares en el entorno celular

ZEISS Spectral RICS combina las imágenes del microscopio de barrido láser con la información sobre el comportamiento de las proteínas en su entorno celular. Este enfoque integrado facilita la identificación de regiones con diferentes características moleculares. Gracias a la técnica de desmezclado espectral, Spectral RICS proporciona una base óptima para investigar la interacción proteína-proteína.

Obtenga información sin sesgos de la interacción entre proteínas
Explore la movilidad dentro del contexto celular
Integre las imágenes confocales con las características moleculares

Series temporales originales (izquierda) y mapa de calor en cuadrícula (derecha). El análisis de RICS revela que la difusión de la EGFP es más lenta dentro de los nucléolos que en el nucleoplasma. Muestra cortesía de P. Hemmerich y T. Ulbricht, Core Facility Imaging, Instituto Leibniz para el estudio del envejecimiento, Jena, Alemania.

Espectroscopia de correlación de imágenes ráster

Estudio de las dinámicas moleculares a nivel celular

La espectroscopia de correlación de imágenes ráster (RICS) es una técnica avanzada que se utiliza en la captura de imágenes biológicas con el fin de estudiar la dinámica de las moléculas y partículas a nivel celular. Su función consiste en analizar el movimiento de partículas marcadas con fluorescente en una imagen obtenida mediante escaneo de trama de una muestra. Gracias a la correlación de las fluctuaciones de intensidad de los diferentes píxeles de la imagen, RICS proporciona información sobre los coeficientes de difusión, la concentración y las interacciones de estas partículas.

La hipótesis sobre una supuesta interacción entre dos proteínas puede rechazarse con el análisis de RICS después del desmezclado espectral. Muestra cortesía del Prof. Jelle Hendrix, Dynamic Bioimaging Lab, Advanced Optical Microscopy Centre, Biomedical Research Institute, Universidad de Hasselt.

Las ventajas de la RICS espectral

Descubra el comportamiento real de las proteínas en las células vivas

ZEISS Spectral RICS ha sido desarrollado en colaboración con el Prof. Jelle Hendrix de la Universidad de Hasselt (Bélgica). Esta extensión incorpora el desmezclado espectral al método RICS, ayudándole a prevenir fallos en la interpretación de los espectros superpuestos como interacciones de proteínas. Con los espectros desmezclados, obtendrá información no sesgada y podrá descubrir el comportamiento real de las proteínas en las células vivas.

ZEISS Spectral RICS es una extensión de ZEN basada en el flujo de trabajo, que le guía desde la configuración del experimento hasta el análisis de los datos. Incluye desmezclado espectral, análisis de autocorrelación y correlación cruzada, mapas de calor de intensidad y cuadrícula, y análisis en función del tiempo, en combinación con herramientas, como la selección de regiones de interés y el umbral de intensidad.

Ejemplos de aplicación de ZEISS Spectral RICS

Efectos de la SUMOilación en la difusión de proteínas

RICS puede utilizarse para medir los cambios de difusión que resultan de la interacción de proteínas. Mediante el análisis estándar de autocorrelación de RICS, podemos observar que el coeficiente de difusión disminuye proporcionalmente al tamaño de la cadena de SUMO. Este tipo de estudio también puede medir los cambios en la difusión de las proteínas de interés que hayan sido marcadas por la presencia de acciones farmacológicas, mutaciones u otras influencias.

Interacción de LEDGF con las histonas

LEDGF es un factor de transcripción que interacciona con la cromatina y H2B es una histona que interviene en la organización del ADN eucariota. Antes del desmezclado espectral, el análisis de correlación cruzada de las dos proteínas de RICS muestra una fuerte interacción. Sin embargo, el desmezclado espectral revela que la interacción de las dos proteínas es muy pequeña en la mayoría de los núcleos.

Exploración del comportamiento de EGFR en los sitios de acoplamiento de reovirus

El receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) se expresa en la membrana de las células y es uno de los receptores de entrada de los reovirus. Los sitios de llegada y acoplamiento y de los reovirus están marcados en color magenta. El análisis de RICS en forma de mapa de calor de cuadrícula revela que la difusión de EGFR es más rápida cerca de los sitios de acoplamiento de los virus que en otras localizaciones de la membrana.

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