FIB-SEM cryogénique
Capturez un instantané de la dynamique cellulaire à des états proches de l'état natif en ultrarésolution
Représentation schématique d'un flux de tâches typique
1
Une tranche est broyée dans un échantillon vitrifié et non coloré à l'aide d'un faisceau d'ions focalisé jusqu'à ce que la structure d'intérêt devienne visible.
2
La surface de l'échantillon nouvellement exposée de la structure d'intérêt est imagée. Ce processus de broyage et d'imagerie est répété jusqu'à ce que la structure soit complètement imagée. L'échantillon reste vitrifié pendant toute la durée du processus.
3
Les images acquises au microscope électronique sont traitées et alignées numériquement dans un ensemble de données 3D. Les compartiments cellulaires peuvent être identifiés et segmentés.
4
L'ensemble des données 3D segmentées peut être visualisé, étudié et analysé statistiquement.
Exemple d'application
Comprendre le processus de biominéralisation des cristaux de calcite dans une algue coccolithophoridée
Formation des coccolithes dans le coccolithophore Emiliania Huxleyi
Visualisation des particules de calcite et de leur environnement ultrastructurel
L'environnement ultrastructurel des phases calciques solubles et amorphes des coccolithophores est difficile à imager avec les protocoles de préparation classiques à base d'eau. Le FIB-SEM utilisé dans des conditions cryogéniques permet d'obtenir des images d'algues marines vitrifiées dans un état proche de l'état natif et d'élucider l'ultrastructure en 3D.
Les cellules E. huxleyi ont été congelées à haute pression. Pendant le processus d'imagerie, l'échantillon a été maintenu dans un état de congélation ; l'ensemble des données FIB-SEM a été acquis à l'aide de ZEISS Crossbeam dans des conditions cryogéniques. La reconstruction 3D montre les coccolithes matures (jaune), un coccolithe en statu nascendi (bleu) et les corps lipidiques (rouge).