Imagerie MEB par coupes sériées
Sectionnement hautement automatisé et imagerie de données volumétriques
Représentation schématique d'un flux de tâches typique
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Un échantillon enrobé de résine est découpé à l'aide d'un ultramicrotome monté à l'intérieur de la chambre du MEB. La surface exposée de l'échantillon est imagée. Ce processus de coupe et d'imagerie est répété jusqu'à ce que la structure d'intérêt soit complètement imagée.
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Les images acquises au microscope électronique sont traitées et alignées numériquement dans un ensemble de données 3D. Les compartiments cellulaires peuvent être identifiés et segmentés.
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L'ensemble des données 3D segmentées peut être visualisé, étudié et analysé statistiquement.
Exemples d'application
Comprendre la relation entre la structure et la fonction
Imagerie des détails ultrastructurels des neurones
Le cerveau est un organe complexe qui compte des millions de connexions neuronales et voies de signalisation. Appréhender la relation entre la structure et la fonction du tissu cérébral permet d'élucider une partie de cette complexité afin de mieux comprendre l'organisation des réseaux neuronaux et, à long terme, de traiter certaines pathologies par des interventions médicales.
Imagerie des neurones en culture cellulaire
Le SBF-MEB est la solution idéale pour imager et suivre les neurones présentant des protubérances longues et fines, par exemple les dendrites et axones. Les neurones en culture cellulaire sont particulièrement difficiles à imager. La forte proportion de résine non conductrice rend les échantillons susceptibles de se charger. Focal Charge Compensation atténue les effets de charge et garantit une qualité d'image élevée. Les détails ultrastructurels des neurones peuvent être facilement imagés et résolus avec le SBF-MEB en combinaison avec Focal Charge Compensation.
Les images montrent une seule coupe d'un ensemble de données 3D de neurones hippocampiques cultivés exprimant PSD95-APEX2 pour colorer les densités post-synaptiques (flèches). Les images ont été acquises à l'aide de ZEISS FESEM, d'un ultramicrotome intégré et de Focal Charge Compensation. Grâce à l'élimination des effets de charge, l'ultrastructure, comme les dendrites fines et les connexions, est visible avec une haute résolution.
Neurones uniques et compartiments cellulaires dans le tissu cérébral d'une souris
Dans la vidéo, les coupes transversales d'un échantillon de cerveau de souris sont capturées à l'aide d'une imagerie MEB par coupes sériées. La haute résolution offerte par cette approche peut être clairement observée dans chacune des images block-face. Les neurones et les compartiments cellulaires peuvent être identifiés et suivis le long de la dimension z.