Molecular Quantification Toolkit

Les expériences de photoblanchiment et de photoactivation nécessitent une définition précise des compartiments cellulaires pour les organites ou les condensats à manipuler. ZEN Molecular Quantification Toolkit vous permet de configurer facilement les régions d'intérêt, soit à la main, soit par analyse automatisée, et de les séparer en régions de blanchiment ou de contrôle. Grâce à la technologie laser du système confocal, ces régions sont ensuite ciblées pixel par pixel, à la longueur d'onde et à l'intensité les plus efficaces.

Les expériences de dynamique moléculaire impliquent une analyse sophistiquée nécessitant l'intégration de régions ou d'images de référence ou encore l'ajustement de courbes exponentielles. La boîte à outils fournit des analyses guidées pour les applications de photomanipulation, telles que les constantes de diffusion de la cinétique de 1er ou 2e ordre dans la FRAP, toutes les méthodes typiques pour le calcul de l'efficacité FRET, et une analyse ratiométrique flexible. En outre, elle fournit une visualisation remarquable des résultats.

La méthode de redistribution de fluorescence après photoblanchiment (FRAP) permet d'étudier la mobilité d'une molécule fluorescente. Les fluorophores sont inactivés de manière irréversible dans une petite région. La vitesse à laquelle les molécules fluorescentes voisines échangent avec cette région permet de déterminer la vitesse de diffusion et la quantité de molécules liées et non liées.

Au-delà de la FRAP standard, il existe plusieurs méthodes apparentées. La FRAP inverse (iFRAP) et la « perte de fluorescence par photoblanchiment » (FLIP) permettent de déterminer si une région (par exemple un organite) échange activement avec son environnement ou si elle est isolée. La « localisation de la fluorescence après photoblanchiment » (FLAP) permet une détermination spatiale précise des molécules cibles. La boîte à outils prend en charge toutes ces méthodes.

Pour les mesures, le FRET utilise les principes physiques du transfert de Förster, un transfert d'énergie entre deux fluorophores correspondants très proches (< 10nm). Il révèle les détails précis de l'association ou de la dissociation dynamique des protéines.

La boîte à outils comporte des processus dédiés aux deux méthodes FRET principales, la première étant le photoblanchiment de l'accepteur. Ici, une région d'intérêt est blanchie dans le canal accepteur, ce qui entraîne une inactivation de l'accepteur et empêche tout transfert d'énergie de Förster à partir du donneur.