ZEISS LSM 900 avec Airyscan 2

Afin de minimiser le photoblanchiment et les dommages sur un échantillon vivant, il est utile de réduire le temps d'acquisition et d'employer une puissance de laser minimale. LSM Plus améliore le rapport signal sur bruit et la résolution des structures, telles que les fibres fusiformes.

Dans cet exemple, 100 piles Z ont été capturées avec LSM 900 sur Celldiscoverer 7 en 29 minutes. Les images montrent une projection d'intensité maximale de 38 plans Z. Cellules exprimant H2B-mCherry (rouge) et α-tubuline-mEGFP (cyan).

LSM Plus permet d'améliorer le rapport signal sur bruit lors de l'imagerie de larges volumes à restituer un rendu en 3D. Visualisation de la vascularisation (vert) et des érythrocytes (magenta) par l'expression transgénique d'un reporteur, vue latérale, antérieure à gauche.

Une pile Z de 300 µm avec 81 plans sur trois tuiles a été capturée avec LSM Plus appliqué. Les tuiles ont été assemblées et restituées en 3D avec ZEN – powered by arvis^®.

Échantillon avec l'aimable autorisation de B. Schmid, DZNE Munich, Allemagne

Les images ont été capturées avec LSM 900 sur ZEISS Celldiscoverer 7 à l'aide de détecteurs GaAsP confocaux (rang du haut) et Airyscan 2 en mode HS (rang du bas). Images confocales avec LSM Plus (en haut, à droite) améliorant le rapport signal sur bruit et la résolution des structures mitochondriales. Airyscan Joint Deconvolution (en bas, à droite) offre une résolution encore meilleure de l'architecture des membranes interne et externe par rapport à Airyscan HS (en bas, à gauche). Coloration de la protéine Tom20 de la membrane externe mitochondriale (vert, Alexa fluor-488) et de la protéine ATP5a de la membrane interne mitochondriale (magenta, Alexa fluor-647).

Migration de primordium de ligne latérale et dépôt de neuromastes immatures dans un embryon de poisson zèbre (Danio rerio). Les animaux ont été anesthésiés et incorporés dans une boîte de Petri à fond de verre dans de l'agarose à faible concentration. Une imagerie de haute résolution avec Airyscan 2 en mode Multiplex a ensuite été réalisée sur les positions individuelles. La vidéo montre une projection d'intensité maximale de l'extrémité de primordium de ligne latérale migrant au travers de l'animal (155 plans z). L'acquisition d'image rapide et non invasive inhérente au mode Multiplex d'Airyscan 2 est bénéfique pour ces applications. L'animal n'est pas perturbé par l'imagerie. Des images présentant un rapport signal sur bruit très élevé et un niveau également très élevé de détails peuvent être acquises.

Ligne cellulaire épithéliale de poumon humain A549 colorée avec Mitotracker Orange (mitochondries) et ADN-SIR (noyaux).

L'acquisition combine sans le moindre problème deux modes d'imagerie : les canaux fluorescents sont capturés en mode confocal à l'aide de détecteurs GaAsP très sensibles, tandis que le contraste de gradient de phase est basé sur une caméra.

Un time-lapse de 2,5 h a été créé en utilisant un grossissement de 40× et une ouverture numérique de 0,95.