ZEISS LSM 980 avec Airyscan 2

LSM Plus améliore littéralement toute expérience confocale avec facilité, indépendamment du mode de détection ou de la plage d'émission. Sa déconvolution par filtre de Wiener linéaire ne nécessite pratiquement aucune interaction et garantit un résultat quantitatif fiable. À l'image de notre traitement éprouvé à super résolution Airyscan, les informations sur les propriétés optiques sous-jacentes sont adaptées automatiquement en fonction de l'objectif, de l'indice de réfraction et de la plage d'émission.

Appliquez LSM Plus sans effort supplémentaire et profitez des avantages suivants :

• Amélioration du rapport signal sur bruit à une vitesse d'acquisition élevée et à une faible puissance laser, particulièrement utile pour l'imagerie de cellules vivantes à faibles niveaux d'expression
• Résolution améliorée des données spectrales, jusqu'à 36 canaux en un seul scan
• Davantage d'informations spatiales et une amélioration accrue de la résolution pour les échantillons brillants qui permettent de fermer le sténopé du LSM
• Processus intégrés pour combiner les avantages du LSM Plus avec l'imagerie à super résolution Airyscan

_{Légende : Chambres d'œufs de drosophile colorées pour la F-actine (phalloidine, magenta) et la DE-Cadhérine (cyan). Avec l'aimable autorisation de T. Jacobs, AG Luschnig, WWU Münster ; avec T. Zobel, Réseau d'imagerie de Münster, Allemagne}

Airyscan 2 est un détecteur de zone comportant 32 éléments de détection disposés de manière circulaire. Chacun d'entre eux agit comme un petit sténopé, contribuant à capturer des informations de super-résolution, tandis que la zone complète du détecteur collecte plus de lumière que le réglage confocal standard. Cette procédure résulte en une efficacité lumineuse supérieure, parallèlement à la saisie d'informations structurelles améliorées.

Élargir votre plage spectrale dans l'infrarouge proche vous permet d'utiliser en parallèle un plus grand nombre de marquages. Dans vos expériences multicolores, visualisez des structures supplémentaires avec plus de colorants, grâce aux détecteurs Quasar et NIR qui prennent efficacement en charge les expériences de multiplexage spectral. Les marquages fluorescents NIR sont moins phototoxiques pour les échantillons vivants en raison de leur longueur d'onde plus grande. Vous avez donc la possibilité d'étudier des échantillons vivants pendant de plus longues périodes en limitant l'influence de la lumière. En outre, la lumière de plus grandes longueurs d'onde est moins diffusée par l'échantillon de tissu, ce qui augmente la profondeur de pénétration.

Pour les nombreux avantages que vous recherchez avec les marquages NIR, le détecteur NIR à double canal combine deux technologies de détection (GaAsP et GaAs à rouge étendu) pour une sensibilité optimale jusqu'à 900 nm.

Pour séparer les signaux qui se chevauchent fortement ou éliminer l'autofluorescence, effectuez un Scan Lambda avec toute la gamme de détection utilisant jusqu'à 36 détecteurs, en réduisant au minimum l'éclairage et le temps nécessaires. Avec LSM Plus, améliorez l'imagerie spectrale sur toute la gamme de longueurs d'onde, y compris l'empreinte en ligne.

L'exemple montre un muscle crémaster murin, marqué en plusieurs couleurs avec Hoechst (bleu), Prox-1 Alexa488 (vert), cellules neutrophiles Ly-GFP, PECAM1 Dylight549 (jaune), SMA Alexa568 (orange), VEGEF-R3 Alexa594 (rouge), plaquettes Dylight 649 (magenta). Acquis avec un détecteur GaAsP à 32 canaux utilisant le système d'empreinte en ligne.

_{Légende : Comparaison du rapport signal sur bruit amélioré avant et après le traitement LSM Plus. Avec l'aimable autorisation du Dr S. Volkery, MPI pour la biomédecine moléculaire, Münster, Allemagne}

La microscopie multiphotonique (microscopie à deux photons, microscopie optique non linéaire, NLO) est une méthode privilégiée pour l'imagerie tissulaire non invasive et profonde d'échantillons vivants ou fixés, notamment en neurosciences. La microscopie multiphotonique s'appuie sur la moindre absorbance et diffusion par les tissus des grandes longueurs d'onde (600 à 1300 nm), qui pénètrent donc plus profondément dans l'échantillon en formant un point focal. L'énergie nécessaire pour exciter un colorant fluorescent n'est pas fournie par un seul photon, mais par deux photons apportant chacun la moitié de l'énergie. La probabilité que deux photons atteignent le fluorophore en même temps n'est suffisante qu'au point focal. C'est pourquoi la lumière d'émission provient du plan focal et peut être efficacement détectée, générant une section optique sans sténopé.

_{Légende : Diagramme énergétique de la microscopie à deux photons}

Combinant un éclairage ponctuel par laser, un balayage linéaire et des détecteurs capables de capturer le signal en mode comptage de photons, LSM 980 est bien plus qu'un dispositif d'imagerie :

• Spectroscopie par corrélation d'images matricielles (RICS)
• Spectroscopie de corrélation de fluorescence (FCS)
• Spectroscopie fluorescente à corrélation croisée (FCCS)
• Transfert d'énergie par résonance de Förster (FRET)
• Redistribution de fluorescence après photoblanchiment (FRAP)
• Microscopie d'imagerie par fluorescence à durée de vie (FLIM)

_{Légende : Principe de la spectroscopie de corrélation de fluorescence (FCS). Trajectoire d'une particule fluorescente à travers le volume de détection}