分子定量化ツールキット

フォトブリーチや光活性化実験では、操作する細胞小器官や凝縮体の細胞区画を正確に定義する必要があります。ZEN分子定量化ツールキットを使用すると、手作業または自動解析により、関心領域を簡単に設定し、ブリーチング領域またはコントロール領域に分けることができます。共焦点システムのレーザー技術により、これらの領域は、最も効率的な波長と輝度で、ピクセルごとに焦点を合わせられます。

分子ダイナミクス実験では、参照領域や画像の統合、または指数曲線フィッティングを必要とする高度な解析が求められます。本ツールキットは、FRAPにおける1次または2次の速度論からの拡散定数、FRET効率計算のためのあらゆる典型的な方法、および柔軟なレシオメトリック解析など、フォトマニピュレーションアプリケーションのためのガイド付き解析を提供します。さらに、結果を見た目に美しく可視化することもできます。

フォトブリーチ後蛍光回復（FRAP）法は、蛍光分子の動態を調べる方法です。蛍光色素は小さな領域で不可逆的に不活性化されます。隣接する蛍光分子がこの領域と交換する速度によって、拡散速度や、結合分子と非結合分子の量を判断できます。

標準的なFRAP以外にも、さまざまな関連する手法が存在します。逆FRAP（iFRAP）と「フォトブリーチ内蛍光減衰（FLIP）」により、ある領域（細胞小器官など）がその環境に活発に反応しているのか、それとも孤立しているのかを判断できるようにます。「フォトブリーチ後蛍光回復（FLAP）」は、ターゲット分子の正確な空間決定を可能にします。本ツールキットはこれらすべての手法に対応しています。

測定において、FRETは非常に近接した（10 nm未満）2つの蛍光色素間のエネルギー移動である蛍光共鳴エネルギー移動の物理原理を利用します。これにより、タンパク質の動的な会合や解離の詳細が高精度に明らかになります。

本ツールキットには2つの主要なFRET法専用のワークフローがあり、1つ目はAcceptor Photobleaching法です。ここでは、アクセプターチャネルで関心領域がブリーチされます。これはアクセプターの不活性化につながり、ドナーからの蛍光共鳴エネルギー移動を妨げます。