蔡司冷冻关联工作流程

冷冻电镜的常见问题有样品损耗、冰污染和脱玻璃化作用。蔡司冷冻关联工作流程的设计旨在保护您珍贵的玻璃化样品，避免在工作流程中可能出现的众多隐患。

蔡司冷冻配件包与蔡司LSM/Airyscan和蔡司Crossbeam的成像功能搭配，可减轻在冷冻条件下工作时损耗或破坏您样品的风险。

在工作流程中管理您的样品之前，玻璃化本身即是一项挑战。尽管玻璃化技术近年来有所发展，但样品仍然经常覆盖在厚冰层下，或只是部分玻璃化，并显示出无定形的冰区域。玻璃化不佳会破坏细胞和组织的超微结构。除非您的光学显微镜或FIB-SEM早在工作流程初期便提供了样品评价的方法，否则只能在TEM中识别这些区域。

蔡司LSM使用不同的观察方式来提供这一评估能力。蔡司Crossbeam出色的衬度性能还可以对样品质量进行可靠评估。这将为您节省时间，并提高实验效率。

冰厚度测量对于判断样品质量和定位玻璃化样品中感兴趣的细胞至关重要。使用光学显微镜可以轻松验证您的样品。反射光和共聚焦荧光成像为您提供关于质量的一手信息，让您清晰定位有研究价值潜力的细胞。

如果荧光信号呈模糊蛛网状图形，通常表明冷冻效果差。此外，快速冷冻样品会在一个样品中展现出不同的冷冻质量和保存状态。在进入下一个冷冻关联工作流程阶段之前，关于冰厚度和质量的信息可以节省预选细胞的时间。

一旦在LSM系统中识别出细胞结构（如纺锤极体），蔡司Crossbeam出色的成像质量便可让您使用冷冻体积成像对超微结构进行定位和分析。即便是使用低加速电压，Crossbeam也能在保护样品不受损伤的同时对未染色的玻璃化样品进行高衬度成像。LSM采集到的高分辨率图像和Crossbeam的高衬度图像方便您进行精准的图像叠加。使用ZEN Connect在Crossbeam中重新定位感兴趣区域，便可采集到已识别细胞的三维数据集。在关联三维结构中，两个纺锤极体得到定位。根据FIB的切割方向，单个微管的取向在高衬度图像中变得清晰可见。更多的细胞腔室可以在三维结构中得以识别。

_{样品由瑞士苏黎世联邦理工学院的M. Pilhofer提供}

植物对变化的环境条件（如盐度增加）所作出的反应是植物科学中一个重要的研究课题。在应对这些变化条件时，植物通常会表现出应激反应。在超微结构层面能够观察到的一个效应是基质（Stromule）的形成，基质是色素体中的长管状延伸。

ZEN Connect展示了不同成像模式的图像：LSM使用样品的自发荧光来定位气孔和内化色素体。成功重定位感兴趣区域后，LSM图像与所选气孔的SEM预览图相叠加。气孔的FIB序列图像得到采集。电镜数据集显示了色素体中基质形成的增长。

_{样品提供者：德国霍恩海姆大学的B. Franzisky}