蔡司Lattice SIM 3
对发育生物体和组织微观结构进行快速光学切片
蔡司Lattice SIM 3专为满足多细胞生物体和组织切片的成像需求而设计。该系统充分发挥了SIM Apotome技术的潜力:高质量的快速光学切片、在大观察视野下也可对较小感兴趣区域进行解析、近乎各向同性的分辨率以及低光毒性的超分辨率成像。
采集整个模式生物和组织切片
蔡司Lattice SIM 3充分利用SIM Apotome技术,在大观察视野下提供出色的光学切片,分辨率近乎各向同性。在对较大体积(如三维模式生物、胚胎、类器官或组织切片)进行快速成像时,蔡司Lattice SIM 3是您的理想之选。无论您使用的是活体还是固定样品,该系统都能以出色的穿透深度对多细胞生物体进行结构光照明显微观察。
图片说明:细胞团,线粒体染色(MitoTracker Green)和细胞核(NucRed Live 647)染色。
用与宽场图像一样的速度和低光毒性获取超分辨率图像
您可以选择标准SIM Apotome成像模式以获得更高可用分辨率,或选择相位更少的成像模式,略微降低分辨率但显著提高速度并降低光毒性。将SIM Apotome与Leap模式相结合,则可大大加快超分辨率图像的采集速度。SIM Apotome甚至可以实现几乎无损的图像采集,每幅重构图像只需要一幅原始图像。
图片说明:细胞团侵入胶原基质,细胞表达Lifeact-tdTomato,彩色深度投影。
从大视野观察到超分辨细节
对于大型样品实验,蔡司Lattice SIM 3提供了大观察视野和超分辨率成像的组合。将SIM Apotome模式与SIM²图像重构有机结合,可实现精细至140 nm的横向超分辨率并提供出色的光学切片和灵敏度。此外,在Lattice SIM模式下使用蔡司25×多介质物镜进行成像,随后用SIM²进行处理,可提供类似的横向分辨率和更大的成像视野,并能更灵活地适应样品的折射率。
图片说明:小鼠大脑,在SIM Apotome和Lattice SIM模式中进行了成像,Z轴序列范围为170 µm。预览图:Plan-Neofluar 10×。三维渲染:LD LCI Plan-Apochromat 25× / 0.8 Imm Corr。样品由德国慕尼黑大学MCN的Herms实验室提供。
蔡司Lattice SIM 3背后的技术
SIM Apotome
具有出色质量的光学切片
当使用宽场显微镜进行活细胞成像时,常常会受到非焦平面模糊信号及背景信号的干扰,这些干扰会降低对比度和分辨率。蔡司Lattice SIM 3充分利用SIM Apotome技术的各项优势,使低放大倍率物镜能够实现结构光照明显微成像,从而为您的多细胞样品提供快速且低光毒性的光学切片。
SIM Apotome采集模式与SIM²重构算法有机结合,使您能够以高对比度、高分辨率的方式进行温和且快速的活细胞成像。在以不同放大倍率获取大面积或大体积样品图像的同时,您也可以使用快速光学切片来提高工作效率。
宽场图像
图像质量会受到非焦平面模糊和背景信号的影响。(焦平面的信号被白色虚线所包围。)
SIM Apotome采集
使用栅格结构光在3个或者5个不同位置照明并快速调制焦平面中的荧光信号。
重构的光学切片
在采集具有不同栅格位置的图像后,这些图将组合为一张合成图像,其中只包含焦平面的信息。
速度和分辨率同样重要
更快的成像速度和更短的曝光时间是成像实验中恒久不变的需求。稳健灵活的蔡司Lattice SIM 3结构光照明模式加上图像重构软件,可以显著减少SIM Apotome采集模式所需的相位图像数量,而且最终图像的分辨率并不会因此受到严重影响。SIM Apotome采集可以在每帧3个相位图像的情况下进行,由此将成像速度提高66%。提高速度也有利于对大范围样品区域(例如组织切片)进行快速筛选。
将其与Leap模式相结合之后,您可以进一步减少最终每幅图像所需相位图像的数量,以尽可能温和地进行超分辨率成像。
Lattice SIM
您的3D超分辨率技术
蔡司Lattice SIM 3还包括经过优化的Lattice SIM成像模式,该模式为25×多介质物镜专门优化,使用晶格点阵结构光而非栅格来照射样品区域。晶格结构光能提供更高的对比度,以确保更深的样品穿透能力,还能与SIM²相结合,成功实现高达140 nm超分辨率的稳健图像重构。
进一步提高SIM成像速度
使用加速模式即可进一步提高2D和3D成像的时间分辨率和图像采集效率。
2D Burst模式:获取完整的时间信息
Burst模式处理使用滚动窗口法,让您能以高达255 fps的速度观察活体样品的动态过程。由于Burst模式是后处理步骤,因此您可以灵活地将其用于先前获取的数据集。数据分析所需的时间分辨率由您全权决定。
3D Leap模式:数字光学切片达到新的水平
对于要求苛刻的三维快速成像,Leap模式使您不仅能够缩短成像所需时间,而且可以减少样品的曝光量。仅需每三个平面仅需成像一次,即体积成像速度了提高三倍,曝光量减少三分之二。
免疫学中的超分辨率成像
放大微小细节
免疫荧光标记的组织切片通常用于免疫学研究以调查病原体和免疫细胞之间的分布和相互作用,旨在开发防治病原性疾病的新疗法。为了获得令人信服的结果,不仅需要对完整切片进行成像以避免遗漏相关区域,以足够高的分辨率成像以识别和量化单个事件也同样十分重要。
在此处所示的应用实例中,研究人员对皮肤组织切片进行了成像,以研究CD8细胞相对于利什曼原虫寄生虫感染位点的分布。放大的区域仅为数字放大,这意味着可以放大预览图的任何区域并量化细胞核、CD8细胞和利什曼原虫寄生虫。
神经学中的超分辨率成像
了解神经元如何应对损伤、疾病和代谢变化
突触结构,尤其是释放突触小泡的活性区,在神经元的信号传递和正常功能方面发挥着关键作用。对活性区成像所需的分辨率超出了标准共聚焦显微镜所能达到的水平。
Sean Sweeney教授的实验室研究了一种新型突变体,该突变体是神经元活性和代谢反应的调节因子。研究人员使用突触结合蛋白共标记神经系统和突触,以观察突触的一般结构和突触前小泡的分布。超分辨率显微技术有助于识别并量化突触结构和活性区构成方面存在的差异。
对活酵母进行超分辨率成像
以近各向同性分辨率实现低光毒性快速成像
活酵母细胞是荧光显微成像领域中最具挑战性的样品之一。它们对光非常敏感,并且比大多数使用的细胞系更小。此外,酵母细胞在悬浮液中生长;它们可以在培养皿中自由移动,呈现球形外观,且没有明确的运动方向。应对上述这些挑战要求十分柔和且迅捷的成像,并且在所有空间维度上都具有高分辨率。
SIM²Apotome是以超分辨率对活酵母细胞成像的理想工具,并且足够迅捷和柔和,可以用来长时间观察细胞。此示例清楚地展示了这一颇具特色的功能。研究人员使用超折叠GFP标记各种亚细胞组分(表面标记物、内体、液泡、内质网)并持续对它们成像12小时。
大体积样品成像
即使在深处也能获得完整细节
减少相位采集数的SIM Apotome与Leap模式有机结合,使您能够十分迅速且高效地实现大体积样品成像。获取每张最终重构图像仅需拍摄一张原始图像,从而轻松拍摄大体积样品。选择感兴趣区域,切换物镜,然后使用Lattice SIM,以在整个样品范围内获得横向分辨率精确至140nm的超分辨率图像。
汤教授及其团队(Hsiao et al., Nature Communications 2023)开发了一种新型透明化和包埋技术,将其与SIM Apotome采集技术和出色图像重构技术相结合,使我们能够在数分钟之内对3 mm × 4 mm、厚度约为200 µm的整个小鼠肠道切片进行成像。即使在较深位置,也能对血管和神经网络进行精细观察。