蔡司Apotome 3 光学切片技术在宽场显微镜荧光成像中的应用
通过采用结构光照明,可简单高效地消除非焦平面杂散光。蔡司Apotome 3根据在不同栅格位置获得的多幅图像,计算出光学切片图像。即便是厚样品也能获取高衬度图像,同时保持一如既往的操作简便性。
出色的光学切片图像
即使厚样品也表现出色
相比于传统荧光显微镜,Apotome 3显著提高了轴向分辨率:即使是厚样品也能从中获取高质量光学切片,进而对其进行三维渲染。三种不同几何结构的栅格可让各种物镜达到极佳的分辨率。由于能够自动选择理想的栅格,通常可获得高衬度光学切片,让您得以潜心专注于实验。
图片说明:转基因斑马鱼幼仔。由德国莱布尼茨老龄化问题研究所——Fritz-Lipmann-Institut e.V.(FLI)的H. Reuter提供。
经同行评审的算法
用于真实光学切片的线性方法
基于软件的解决方案需要具有样品的先验知识(基于AI的方法),或依赖尚未经过同行评审的复杂算法。用户必须相信这些黑匣子解决方案仅生成真实的结构。蔡司Apotome 3使用线性方法和充分证实的算法,支持您计算真实可靠的光学切片。
图片说明:皮质神经元(左:宽场,右:Apotome 3)。由德国莱布尼茨老龄化问题研究所——Fritz-Lipmann-Institut e.V.(FLI)的L. Behrendt提供。
更多结构信息
比较宽场、光学切片和去卷积
通过运用结构光照明,去卷积算法进一步提升图像品质。在保留所有原始数据的同时,您可以在宽场、光学切片与去卷积图像之间切换,从而实现极高的灵活性,让图像的对比更加一目了然。去卷积算法可靠易用,可同时提高横向和轴向分辨率。由于衬度提高且噪点得到抑制,您可以更好地识别所检查物体的结构。
图片说明:皮质神经元。由德国莱布尼茨老龄化问题研究所——Fritz-Lipmann-Institut e.V.(FLI)的L. Behrendt提供。
自由选择光源和染料
无需担心技术限制,随心选择
实验的复杂性和要求在不断提高,这就是为什么您需要适应性强的设备。您可将Apotome 3与金属卤化物灯、经济型白光LED灯或低光毒性多色Colibri照明系统配合使用。无论是DAPI、Alexa488、Rhodamin、Cy5等荧光染料,还是GFP、mCherry等活体染料,Apotome 3都会自动适应您的荧光基团和光源,为您呈现符合预期的清晰而明亮的图像。
Apotome 3工作原理
Apotome 3使用栅格生成具有强度差异的图案。如果在样品的某个区域存在离焦光,栅格会变得不可见。在获取一个带栅格的荧光图像后,栅格将移至下一个位置,然后便可计算出具有较高衬度和分辨率的真实光学切片。
优化样品切片体积
无论您采用何种放大倍率,Apotome 3都会自动在光路上投射优化的栅格。
A:检测到来自非焦平面区域的发射光。衬度和分辨率降低。B:栅格频率增加可减少不必要的背景荧光干扰。光学切片变得更薄。C:非焦平面的信号被抑制。这极大提高了光学切片的衬度和分辨率。D:在该示例中,“低频栅格”的切片厚度最为理想。此类型图像尤为适用于三维分析及渲染软件处理。
蔡司Apotome 3应用案例
应用实例